图1  悟空K2025二维液相色谱系统

图2  在线固相萃取-二维高效液相色谱法同时分析V_A、V_D、V_E阀切换示意图

表1  二维液相系统色谱条件

图3  混合标准溶液连续进样6针叠加色谱图

注：1：VA；2：δ-VE；3：β-VE；4：γ-VE；5：α-VE；6：VD₂；7：VD₃

对V_A、V_D、V_E混合标准溶液进行测试及重复性考察（图3），三种维生素均具有极佳的峰形；如表2所示，β-VE和γ-VE的分离度为1.76，VD₂和VD₃的分离度为2.35，均可实现良好分离。如表3所示，三种维生素保留时间RSD均≤0.09 %，峰面积的RSD均≤0.72 %，具有良好的定性定量重复性。

标准品的V_A、V_D、V_E在其线性浓度范围内均呈现良好的线性关系，相关系数R均≥0.9999。

图4 婴幼儿配方奶粉样品一维和二维色谱图

注：1：VA；2：δ-VE；3：β-VE；4：γ-VE；5：α-VE；6：VD₂；7：VD₃

婴幼儿配方奶粉试样中V_A、V_D、V_E的含量范围为0.0 mg/100g~10 mg/100g；两次独立测定结果的相对偏差范围为-0.85 %~4.58 %，满足《T/SHFCA 002-2024 特殊医学用途配方食品中维生素A、D、E的测定 在线固相萃取-二维液相色谱法》中规定的在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的15%的要求；加标回收实验中， V_A、V_D、V_E的回收率范围为98.0 %~106.0 %。